СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ

Клиника Диагностика Лечение Высокотехнологичные методы лечения

Подготовка, повышение квалификации врачей по высоким медицинским и клеточным технологиям

Научно-методическая база Публикации, научные работы, методики

Задайте ваш вопрос врачу в режиме "online", свяжитесь с нами

Клеточная трансплантология. Методика лечения стволовыми клетками и фибробластами - Методика лечения стволовыми клетками

Клеточная трансплантология. Информация о проведении лечения с помощью методов клеточной терапии - Методы клеточной терапии

Клеточная трансплантология. Клеточная терапия. Стволовые клетки. Фибробласты. Применение стволовых клеток - Стволовые клетки

Клеточная трансплантология.Ревитализация ( Омоложение ) - Омоложение

Медицинская косметология и эстетическая медицина  - Медицинская косметология

Клеточная терапия обширных поверхностных и глубоких ожоговых ран в настоящее время стала частью комплексного лечения ожоговых больных (1, 2, 3).

Для трансплантации на ожоговую поверхность обычно использовали либо различные клетки: культивированные аллофибробласты взрослого человека (6, 8, 9), либо ауто и аллогенные кератиноциты без или в составе биоинженерных конструкций (7, 15, 16).

Анализ результатов трансплантации этих клеток показал, что использование кератиноцитов, а также фибробластов является, хотя и эффективным, но достаточно дорогостоящим методом лечения, что ограничивает возможности его широкого применения в клинической практике. Кроме того, быстрый переход фибробластов при контакте с коллагеном в фиброциты, которые обладают менее выраженными ростстимулирующими и пролиферативными свойствами, вынудило клиницистов признать, что более эффективным является использование культивированных фетальных фибробластов, так как фетальные клетки обеспечивали  более быструю регенерацию и реконвалесценцию больных (4, 5), чем аналогичные клетки взрослого человека.

Между тем существование нерешенных этических, правовых и юридических проблем, а также отсутствие законодательства, разрешающего забор и использование фетальных клеток заставило исследователей искать другие не менее эффективные, но более доступные источники клеток для заживления обширных, поверхностных и глубоких ожоговых ран кожи. В последние годы во всем мире получили развитие работы по использованию стволовых клеток костного мозга взрослого человека для восстановительного лечения поврежденных органов и тканей.

В настоящее время доказано, что стволовые клетки костного мозга и прежде всего, стромальные клетки костного мозга при создании определенных условий для культивирования способны не только размножаться, но и предифференцироваться в клетки других тканей, в том числе и в фибробластоподобные клетки (13, 14, 17, 18, 19, 23, 24).

Поскольку ауто и аллогенные стромальные стволовые клетки костного мозга при культивировании вырабатывают компоненты матрикса, в том числе фибронектин, ламенин, коллаген и протеогликаны (20, 21) и способствуют неоангиогенезу (10,11,12) стало очевидным, что эти клетки могут служить адекватным биологическим субстратом для решения одной из основных задач эстетической медицины - восстановление естественного внешнего вида термически поврежденных участков кожи.

Целью настоящей работы явился анализ первого опыта использования в клинике аллогенных фибробластоподобных стволовых клеток костного мозга (ФМСК), для создания условий стимуляции восстановительных процессов и ускоренного заживления ожоговых ран  после трансплантации их больному с 10% ожоговой поверхности кожи (IIIА степени повреждения).

Заготовка аллогенного клеточного материала для трансплантации.

Забор клеток костного мозга для получения мезенхимальных стволовых клеток (МСК) и затем из них ФМСК проводили у взрослых людей доноров под местной анестезией. Клетки получали из подвздошной кости с использованием иглы Кассирского. Доноры и их костный мозг были проверены на отсутствие заражения вирусом гепатита В, С, СПИДом, сифилисом, хламидиозом и другими опасными инфекциями.

Клетки костного мозга для получения МСК предварительно культивировали на чашках Петри при 37° С в С0₂- инкубаторе, в атмосфере с 5% С0₂ и с 95% влажностью в среде Iskov’s (Gibco, Grand Island), содержащей 10% бычьей эмбриональной сыворотки (HyClone, USA). Среду заменяли через каждые 3-4 суток. Для получения монослоя МСК требовалось 14-17 суток. В дальнейшем МСК сохраняли методом криоконсервации как исходный материал для получения ФМСК. Для получения ФМСК суспензию МСК размораживали и затем вновь культивировали в течение 7 суток (Фото 1).

Визуальный контроль культивируемых клеток проводили ежедневно, с использованием фазово-контрастной микроскопии (Nikon, Япония).

Из прикрепившихся к поверхности пластика клеток готовили суспензию ФМСК и наносили на поверхность ожоговой раны с помощью пипетки, отходя от края раны на 0,5 см в количестве 20-30 х10³ клеток на см². После трансплантации клеток, ожоговую поверхность покрывали стерильной марлевой салфеткой, смоченной физиологическим раствором с гентамицином. Контроль эффективности клеточной терапии осуществляли визуально во время перевязок на 1-,3-, 6-, 8- е сутки и далее при необходимости.

Описание клинического наблюдения.

Больной Т., 8 лет, поступил в травматологическое отделение в ЦРБ г Оха Сахалинской области 1.06.03г. с диагнозом: Циркулярный термический ожог кожи паром II-IIIА степени нижней трети правого бедра, подколенной области, голени и передней поверхности левой голени площадью до 10% поверхности тела. Из анамнеза выяснено, что больной упал в яму теплоцентрали, где была горячая вода и получил термическую травму. В приемном отделении проведены противошоковые мероприятия и санация ожоговых ран, которая включала в себя также и удаление отслоенного эпидермиса из зон термического поражения. На следующий день повязка была обильно пропитана плазмой, нижние конечности в области икроножных мышц отекли, раны покрылись налетом фибрина. После ежедневной замены высыхающих повязок на влажные пропитанные фурациллином повязки к 6 суткам удалось очистить раны от фибринозного налета и уменьшить отечность конечностей. Однако истечение плазмы  из ожоговых ран продолжалось. Визуально, отмечалось меленькие островки эпителизации ближе к краю ожоговых ран. В центральных участках процесс эпителизации отсутствовал или был подавлен развитием гнойной инфекции. Рана имела тенденцию к углублению (Фото 2). 8.06.03г. после тщательной санации зон термического повреждения на раны  была нанесена суспензия ФМСК в количестве 30-40 х10³ клеток на см² ожоговой поверхности. Суспензия ФМСК была получена из криоконсервированных мезенхимальных стволовых клеток (МСК) ранее заготовленного костного мозга от взрослых людей- аллогенных доноров по технологии и по протоколу разработанным в институте в лаборатории биотехнологии стволовых клеток.

Для получения ФМСК суспензию МСК размораживали и дополнительно культивировали в течении 7 суток, после чего клетки были готовы для трансплантации (Фото 2). После трансплантации ФМСК ожоговую поверхность покрывали стерильной марлевой салфеткой, смоченной физиологическим раствором с гентамицином. Было установлено, что уже через 20 минут после нанесения ФМСК на раневую поверхность ран покрылись блестящей тонкой пленкой, истечение плазмы прекратилось. На следующие сутки повязка оставалась чистой и не прилипала к ожоговым ранам, так как отсутствовала плазморрея. Имело место некоторое утолщение вновь образованной пленки. В последующие сутки рану вели традиционным способом с использованием мази левомеколь. Перевязки производили через 2-3 суток. Уже на 3 сутки после трансплантации ФМСК на ожоговой поверхности можно было увидеть новообразованную сеть сосудов. На 7-е сутки края первоначально образованной пленки в зонах повреждения приподнимались над окружающими здоровыми тканями и легко отделялись от подлежащих тканей. После удаления пленки хорошо просматривался тонкий эпидермальный слой клеток, который равномерно покрывал ожоговую поверхность (Фото 3).

16.06.03г. т.е. на 8 сутки после трансплантации аллогенных ФМСК, ожоговые раны полностью эпителизировались и больной был выписан домой.

Таким образом, проведенная нами трансплантация аллогенных ФМСК позволила существенно ускорить и процесс заживления термических ожогов кожи и тем самым ускорить общий процесс реабилитации ожогового больного. Проведенное нами ранее изучение особенностей течения раневого процесса при моделировании ожогов на животных (10, 11, 12), а также результаты первого клинического опыта применения ФМСК для лечения обширных поверхностных ожогов кожи, описанных выше, позволяют нам заключить:

1.    Пересадка аллогенных ФМСК на ожоговую рану является неинвазивным и безопасным методом лечения термических повреждений кожи IIIА степени.

2.    Метод способствует новообразованию сосудов, в результате чего при ожоговых поражениях IIIА степени активизируется эпителизация ран и снижается риск развития рубцовых образований.

НИИ трансплантологии и искусственных

органов МЗ РФ, к.м.н. М.Ф.Расулов

Адрес: НИИ трансплантологии и искусственных органов МЗ РФ Москва, 123182 ул. Щукинская, д.1. E.Mail: stemcell@newmail.ru